大鼠肝癌细胞（RH-35）

大鼠肝癌细胞(RH-35)
细胞介绍
RH-35细胞株源【yuán】自由N-2feuorenyldiuctamid在雄【xióng】性【xìng】AxC大鼠中诱导的可移植Reulier H-35肝癌。细胞较小，饥【jī】饿24小时可以【yǐ】使其同【tóng】步。
 
细胞特性
1)来源：大鼠，肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保【bǎo】存：使用含有胎【tāi】牛血清的【de】2ml冻存管发送存活细胞【bāo】。收【shōu】到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离【lí】心【xīn】5min后，于洁【jié】净操作【zuò】台弃【qì】去上【shàng】清，加入推荐使用的培【péi】养基后转移至l〇cm培【péi】养皿【mǐn】或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞【bāo】生长状态良好【hǎo】时，再进【jìn】行冻存。具体操【cāo】作见细胞培养步骤。细胞用途【tú】：仅供使【shǐ】用。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养基(DMEM-H，GIBCO添【tiān】加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液体培【péi】养基【jī】：GIBCO，11995-065)。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的【de】冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然后【hòu】将所有细【xì】胞悬液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜（或将【jiāng】
细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二【èr】天换液并检查【chá】细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密【mì】度达【dá】80%-90%，即【jí】可【kě】进行传代培养。对【duì】于贴壁细胞，传代【dài】可参考以下【xià】方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置【zhì】于37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中【zhōng】消化9-21分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜下【xià】观察细胞消化情况，若细【xì】胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培【péi】养基终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培【péi】养液【yè】后吹匀【yún】。
将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的【de】比【bǐ】例分到新的含8ml培【péi】养基的新皿【mǐn】中或者。
细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时【shí】，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含血清的【de】培养基后加入冻【dòng】存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
大鼠肝癌细胞(RH-35)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生【shēng】物危害性【xìng】，必须在二级生物安全【quán】台内操作，并请注【zhù】意【yì】防护，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃，瓶中。