大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）

大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)
细胞介绍
大鼠肾小球【qiú】系膜细胞，贴【tiē】壁生长，常【cháng】用于发生机理的临床研究【jiū】，也【yě】可用干构【gòu】建动物【wù】摸【mō】型。
 
细胞特性
1)来源：大鼠肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶【píng】或者lmL冻存管【guǎn】包装运【yùn】输和【hé】保存：使用含【hán】有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管【guǎn】发送存活细胞。
收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下，离心【xīn】5min后，于【yú】洁净操作台弃【qì】去上清，加入推荐使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养【yǎng】皿者T25培养瓶中培养【yǎng】，传【chuán】代达到【dào】细胞生长状态【tài】良【liáng】好时【shí】，再进行冻【dòng】存。具体【tǐ】操作见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。
 
大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基【jī】(DMEM，GIBCO)，90%;北美【měi】胎牛血清【qīng】(United States，GIBCO，货号 16000-044)，10%。
2.培养条【tiáo】件：气【qì】相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅速摇【yáo】晃【huǎng】解冻，加入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后吹匀。
然后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养【yǎng】过夜【yè】（或将细胞悬【xuán】液加【jiā】入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。
第二天换液并检查细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞【bāo】密度达【dá】80%-90%，即可【kě】进【jìn】行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-19次【cì】。力口 2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消化9-19分钟，然后在显微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培养【yǎng】基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀【yún】后吸【xī】出，在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后【hòu】吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养基的新皿中或者
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基【jī】后，PBS清洗瓶底9-19次后加入【rù】lml胰【yí】酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培【péi】养基终【zhōng】止消化【huà】，可使用血球计【jì】数板计数。lOOOrpm离心4min去掉上【shàng】清。用血清重【chóng】悬浮，加DMSO至终浓度为【wéi】10%。
加入【rù】DMSO后迅速混【hún】匀，按【àn】每lml的数量分配【pèi】到冻存管中，注意冻【dòng】存管做好标识。本公【gōng】司【sī】按每个【gè】冻存【cún】管细【xì】胞数目大于1X106个细【xì】胞冻存。将冻存管置于程序降温盒中【zhōng】，放入-80度冰箱，至【zhì】少2个【gè】小时以后转入液【yè】氮灌储存。
记录冻存管位置以便下次拿取。
 
大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)注意事项：
收到【dào】细胞【bāo】后，若【ruò】发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动【dòng】物【wù】细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在二【èr】级生物【wù】安全台内操作，并请注意防护【hù】，所有废液【yè】及接触过此【cǐ】细胞的器皿需要【yào】灭菌后方能丢弃【qì】瓶中。