永生型大鼠肝储脂细胞（HSC-T6）

永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)
细胞特性
1)来源：大鼠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格【gé】：T25瓶或者lmL冻【dòng】存【cún】管包装【zhuāng】运输和【hé】保存：使用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞。
收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐使用的【de】培养基后转【zhuǎn】移至【zhì】l〇cm培【péi】养皿或者T25培【péi】养瓶中【zhōng】培养【yǎng】，传代达到【dào】细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻【dòng】存。具体操作见细胞培【péi】养步【bù】骤。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培养基【jī】(GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。培养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度【dù】为70%-80%。
2. 冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
 
永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)复苏细胞：将含【hán】有lmL细【xì】胞悬液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴【yù】中迅速【sù】摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后【hòu】将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养过【guò】夜（或将
细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。
第二天换液并检查细胞密度。
 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁【bì】细胞，传代可参考【kǎo】以下方法：弃去【qù】培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙【gài】、镁离子的【de】PBS润洗细【xì】胞9-21次。
力口 2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下【xià】观察【chá】细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变【biàn】圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶【píng】后加少量培【péi】养基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。
 将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新【xīn】皿中或者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培养基后加入【rù】少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变【biàn】圆脱落后【hòu】，加入约lml含【hán】血清的培养基后【hòu】加【jiā】入【rù】冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
永生型大鼠肝储脂细胞(HSC-T6)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥【huī】发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱【tuō】落【luò】、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即【jí】与我们电联。所有【yǒu】动物细胞均视为有【yǒu】潜在【zài】的生物【wù】危【wēi】害性【xìng】，必【bì】须在二级生物安全【quán】台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触过【guò】此【cǐ】细胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃。