人甲状腺癌细胞 （B-CPAP）

人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】人甲【jiǎ】状腺癌细【xì】胞B-CPAP*培养基(配【pèi】方(100ml): RPMI-1640 (lnvitrogen,11875093) 89 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml NEAA(lnvitrogen, 11140)1 ml
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴【yù】中【zhōng】迅速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养【yǎng】瓶【píng】中培【péi】养过夜（或将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜【yè】）。第二天换液并检【jiǎn】 查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养【yǎng】上清，用【yòng】不含【hán】钙、镁离【lí】子的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞【bāo】9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】化9-21分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲几下【xià】培养【yǎng】瓶【píng】后加少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培【péi】养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新的【de】含8ml培养基的【de】新【xīn】皿中或者瓶【píng】中。
 
细【xì】胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时，可进行细【xì】胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细胞冻存时，弃【qì】去培养基后加【jiā】入少【shǎo】量【liàng】胰酶【méi】，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约lml含血清的【de】培【péi】养基后加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞【bāo】有污染【rǎn】，请立即【jí】与我们【men】电联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜【qián】在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在二【èr】级生物安【ān】全【quán】台内操作，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：甲状腺，甲状腺瘤
2)形态：纺锤状或圆形细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人甲状腺癌细胞 (B-CPAP)运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞。收到细【xì】胞【bāo】后，可在1000RPM，常温【wēn】条件【jiàn】下，离心5min后，于【yú】洁净操【cāo】作台弃去上清，加入推荐【jiàn】使用的培【péi】养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养，传代【dài】达到细【xì】胞生长状态良好【hǎo】时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见【jiàn】细【xì】胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。