人正常前列腺基质永生化细胞 （WPMY-1）

人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)
细胞介绍：
通【tōng】过【guò】一个pRSTV质料结构，用SV40大T抗原对基质细胞进行永生化。肌成纤【xiān】维基【jī】质细胞株，WPMY-1与RWPE-1细胞一样，来源于同【tóng】一张成【chéng】人前列腺【xiàn】组织切片的【de】周围【wéi】区域的基质【zhì】细胞【bāo】。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，95%;胎牛血清，5%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2.细胞处理：
1)复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管【guǎn】迅速放入37°C水浴中（水面要低于冻存管【guǎn】盖部）摇晃解冻，移入【rù】事先准备好的含有【yǒu】4mL培养【yǎng】基【jī】的15ml离心管【guǎn】中【zhōng】混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液，加入lmL培 养基【jī】后【hòu】吹匀。然【rán】后将所有细胞悬【xuán】液【yè】移入含【hán】有5ml培养基的培养瓶【píng】中培【péi】养过夜。第二天【tiān】换液并【bìng】检查细胞密度。
2)细胞【bāo】传【chuán】代：如果细胞【bāo】密【mì】度达80%-90%，即可进行传代培养【yǎng】。
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上【shàng】清【qīng】，用不含钙、镁离子的【de】PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消化9-21分钟【zhōng】，然【rán】后【hòu】在显微镜下观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若【ruò】细胞大【dà】部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入3ml此【cǐ】细胞【bāo】的【de】 培养基终止消化。轻【qīng】轻吹【chuī】打后吸出，移入15ml离【lí】心管【guǎn】中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移入到事先【xiān】准备好的含有5ml培【péi】养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培养 基的T-75培养瓶【píng】中【zhōng】培养。
 
细胞冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可进行【háng】细【xì】胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先要消化【huà】处理并进【jìn】行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的9-21步骤进行【háng】，后的重悬【xuán】液【yè】使用血清【qīng】。悬浮【fú】细胞直接计数后离心，用血清重【chóng】悬【xuán】浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅【xùn】速混匀，按每【měi】lml的数量分配到冻存【cún】管【guǎn】中。本【běn】公【gōng】司按每个冻【dòng】存管细胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们电【diàn】联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危害【hài】性，必须在【zài】二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接触【chù】过【guò】此细胞的【de】器皿需要【yào】灭菌后方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：前列腺
2)形态：成肌细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人正常前列腺基质永生化细胞 (WPMY-1)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下确认细胞生长状态，去掉【diào】封口膜并将T25瓶【píng】置【zhì】于【yú】37°C培【péi】养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满【mǎn】（90%以上）请【qǐng】及时进行【háng】细胞传代，传代培养【yǎng】用6ml本公司附 带【dài】的*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请【qǐng】检查细胞是否污【wū】染【rǎn】，若发现污染或疑【yí】似【sì】污染，请及【jí】时与我 们取得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。