人非小细胞肺癌细胞（A549）

人非小细胞肺癌细胞(A549)
细胞介绍：
该细胞【bāo】系由DJ.Griad通过肺癌组织移【yí】植培养建系，患【huàn】者【zhě】为58岁白人男性。A549能通过【guò】胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含【hán】量不饱和脂【zhī】肪酸【suān】的卵磷【lín】脂。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培【péi】养基（F-12K，GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37°C，培养箱湿【shī】度 为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞【bāo】：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中【zhōng】（水面【miàn】要低 于冻存【cún】管盖部）摇晃解冻，移【yí】入事【shì】先准备好的含有4mL培【péi】养基的15ml离心管中混合均匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液【yè】，加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细【xì】胞悬液移入含有5ml培养基的【de】培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜。第二天换液并检【jiǎn】查细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人非小细胞肺癌细胞(A549)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-20次。力口【kǒu】 2m丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-20分【fèn】钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消【xiāo】化情况，若细胞大【dà】部 分变圆【yuán】并脱落，迅速拿【ná】回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入【rù】3ml此细胞的 培养【yǎng】基【jī】终止【zhǐ】消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心【xīn】管中，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀【yún】。移入到【dào】事先【xiān】准备好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培【péi】养【yǎng】瓶【píng】中或含有14ml培养 基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存：待细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，可进行【háng】细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先【xiān】要消化处理【lǐ】并【bìng】进行细胞计数。消化方法按照细【xì】胞【bāo】传代方法的9-20步骤【zhòu】进行，后的重悬【xuán】液使用血清【qīng】。悬浮细胞直接计数后离【lí】心，用血清重悬【xuán】浮，加DMSO至终浓【nóng】度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速【sù】混匀【yún】，按【àn】每【měi】lml的数量分配到冻存管中【zhōng】。本公司按每【měi】个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存【cún】管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染， 请立即与【yǔ】我们【men】电联
所【suǒ】有动物细胞均视【shì】为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必【bì】须在二级生物安全台内操作， 并【bìng】请注意防护，所有废液及接触过【guò】此细胞【bāo】的器【qì】皿需要【yào】灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人非小细胞肺癌细胞(A549)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去掉【diào】封口膜并将【jiāng】T25瓶【píng】置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上【shàng】）请及时进行细胞传代【dài】，传代培【péi】养【yǎng】用6ml本【běn】公司附 带的*培【péi】养基。
5.接到细胞次日，请【qǐng】检查细胞【bāo】是否污【wū】染【rǎn】，若发现污染或【huò】疑似污染，请及时与我们【men】取【qǔ】得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。