人原位胰腺腺癌细胞（BxPC-3）

人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)
细胞介绍：
该细胞【bāo】株不表达囊肿性纤维【wéi】化跨膜电导调节子【zǐ】(CFTR)。CFTR阳性的【de】细胞株是【shì】Capan-l〇
  
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPMI-1640:GIBCO,，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2. 培养【yǎng】条件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
  
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将【jiāng】含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】迅速放入37°C水【shuǐ】浴中（水【shuǐ】面要低于【yú】冻存【cún】管盖部）摇晃【huǎng】解冻，移入事先【xiān】准备好的含有4mL培养基的15ml离【lí】心【xīn】管中混合【hé】均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，加入【rù】lmL培【péi】养基【jī】后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中【zhōng】培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-21分【fèn】钟，然后【hòu】在显微镜下观【guān】察【chá】细胞消化情况，若细【xì】胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱落，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲几下培养瓶后【hòu】加【jiā】入3ml此细胞的 培养基【jī】终【zhōng】止消化。轻轻吹打后【hòu】吸出，移入15ml离心【xīn】管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分【fèn】钟， 弃【qì】去上清液，加入lmL培养液后吹匀。移入到【dào】事先准备好的【de】含有5ml培养基【jī】的T-25培【péi】养瓶中或含有【yǒu】14ml培养【yǎng】基的T-75培养瓶中培【péi】养。
细【xì】胞冻存：待细胞生【shēng】长状态【tài】良好时【shí】，可进【jìn】行【háng】细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照【zhào】细【xì】胞传代方法的9-21步骤进行，后的【de】重【chóng】悬【xuán】液使用血清。悬浮【fú】细胞直接计【jì】数后离心【xīn】，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每【měi】lml的数【shù】量分配到冻存管中【zhōng】。本公【gōng】司按每【měi】个冻【dòng】存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
  
注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发【fā】现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立即与我们电【diàn】联。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生物安【ān】全【quán】台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废【fèi】液及【jí】接触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：胰腺；腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
  
人原位胰腺腺癌细胞(BxPC-3细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显【xiǎn】微镜下确【què】认细胞生长状态，去掉【diào】封【fēng】口膜并【bìng】将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满（90%以上）请及时进行细胞传代【dài】，传代培养用6ml本公司附带的【de】*培养基。
5.接到细胞次【cì】日，请检【jiǎn】查细【xì】胞是【shì】否污染，若发现污染或【huò】疑似污染【rǎn】，请及时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用