人视网膜上皮细胞（ARPE-19）

人视网膜上皮细胞(ARPE-19)
细胞介绍：
该细胞系源自【zì】于【yú】一名19岁车祸罹【lí】难的健【jiàn】康男性的视网膜组织，由【yóu】Amy Aotaki-Keen建系于1986年。该细胞系表达视【shì】网【wǎng】膜色【sè】素细胞*的分【fèn】子标记【jì】如【rú】胞 内视黄醛结合蛋白和【hé】PRE-65。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM/F12 培养基(DMEM/F12，GIBCO);北美胎牛血清，10%;双抗1%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】 湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3. 冻【dòng】存【cún】液：90%血清，10%DMSO，现用【yòng】现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃【huǎng】解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培养基混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加l-2mL培养【yǎng】基后【hòu】吹匀。然后将【jiāng】所有细胞悬【xuán】液加入培【péi】养瓶中培【péi】养过【guò】夜【yè】（或将细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液【yè】并检查细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞【bāo】密度达80%-90%，即可【kě】进行传【chuán】代培养。
 
人视网膜上皮细胞(ARPE-19)对于贴壁细胞，传代可参【cān】考以下方法：弃去培养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次【cì】。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培养箱【xiāng】中消化【huà】9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显【xiǎn】微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加【jiā】少量培养基【jī】终止 消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新【xīn】皿中或【huò】者瓶中【zhōng】。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时【shí】，弃去培【péi】养基后，PBS清洗瓶底9-21次后【hòu】加【jiā】入lml胰【yí】酶【méi】，细【xì】胞变【biàn】圆【yuán】脱落后，加【jiā】入2ml*培养基终止消化【huà】，可【kě】使用血球计数板【bǎn】计数。1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到【dào】冻存【cún】管中【zhōng】，注意冻存 管【guǎn】做【zuò】好标识。本公司【sī】按每【měi】个冻【dòng】存管细【xì】胞【bāo】数【shù】目大于【yú】1X106个细胞冻【dòng】存。将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰【bīng】箱，至【zhì】少【shǎo】2个小【xiǎo】时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖【gài】脱落、破损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜在【zài】的生【shēng】物危害性，必【bì】须【xū】在【zài】二【èr】级【jí】生物【wù】安全台内操作，并请注意防护【hù】，所有【yǒu】废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：视网膜
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
人视网膜上皮细胞(ARPE-19)运输和保【bǎo】存：可选择干冰运输【shū】及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰【bīng】运输，收到后立即转入液【yè】氮冻【dòng】存【cún】或直接【jiē】复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长【zhǎng】，传代达到细 胞生长状态【tài】良好时，再【zài】进行冻存。具体操【cāo】作见细胞培养【yǎng】步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。