东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒

英文【wén】名称【chēng】：Eastern Equine Encephalomyelitis Virus(EEEV )RTPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反【fǎn】应的【de】物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，东部马脑脊髓炎病毒PCR检测试剂盒PCR 产物的特【tè】异性取决于引物与模【mó】板DNA互【hù】补的【de】程度【dù】。理论上，只要知道任何【hé】一段【duàn】模板DNA序【xù】列【liè】， 就【jiù】能按其设【shè】计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物应遵循以下【xià】原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定条件【jiàn】下可扩增长【zhǎng】至【zhì】10kb的片段。

③引物【wù】碱基：G+C含【hán】量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤【lìng】或【huò】嘧【mì】啶核【hé】苷酸【suān】的成串排【pái】列。

④避免【miǎn】引物【wù】内部出现二级结构，避免两条引物间【jiān】互补，特别【bié】是3'端的【de】互补，否则会【huì】形成引【yǐn】物二聚体，产生【shēng】非特【tè】异的扩增条【tiáo】带。

⑤引物3'端的【de】碱【jiǎn】基，特别是末及【jí】倒【dǎo】数第二【èr】个碱基，应严格要【yào】求配对，以避免因末端碱基不配对【duì】而导致【zhì】PCR失败。

⑥引物中【zhōng】有或能加【jiā】上合适的酶【méi】切位点， 被【bèi】扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切位点， 这对酶切分析【xī】或分子【zǐ】克隆很【hěn】有好处。

⑦引物的特异性：引物【wù】应与【yǔ】核酸序列数【shù】据【jù】库的其它序列无明显同源【yuán】性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以【yǐ】*引物量产生【shēng】所需要【yào】的结果为好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏【piān】高会引起【qǐ】错配和非特异性【xìng】扩增，且可增【zēng】加引物之间【jiān】形成二聚体的【de】机会。