产品时间:2024-9-22
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产品信息:
产品名称:点状古柏线虫PCR检测试剂盒
英文名称:Cooperia pectinataPCR
准备物品:
清理【lǐ】液(A) 毫升
染【rǎn】色【sè】液(t B) 微升
稀释液(C) 毫升【shēng】
溶解液(tD) 毫【háo】升
产品说【shuō】明【míng】书 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参【cān】加PCR反应的物质主要【yào】有五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,点状古柏线虫PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异【yì】性取决【jué】于引物与模板DNA互补的程【chéng】度。理论上,只要知道【dào】任何一段模板DNA序【xù】列, 就能按其设计互补的寡核【hé】苷酸链做【zuò】引【yǐn】物,利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外【wài】大【dà】量【liàng】扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物【wù】扩增跨度: 以200-500bp为【wéi】宜,特定【dìng】条件下可【kě】扩增长至10kb的【de】片段。
③引物碱基【jī】:G+C含量【liàng】以9-22%为【wéi】宜,G+C太【tài】少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异【yì】条带。ATGC*随【suí】机分布,避免【miǎn】5个以上【shàng】的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免【miǎn】引物内部出现【xiàn】二级结【jié】构,避免【miǎn】两条引【yǐn】物间互【hù】补【bǔ】,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生【shēng】非特【tè】异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别【bié】是末及倒数第二【èr】个碱基,应严【yán】格【gé】要求配【pèi】对,以避免因末端碱基不配【pèi】对【duì】而导【dǎo】致PCR失败【bài】。
⑥引【yǐn】物中有或【huò】能【néng】加上合【hé】适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点【diǎn】, 这【zhè】对酶切分析或【huò】分子克隆【lóng】很有好【hǎo】处【chù】。
⑦引物的特【tè】异【yì】性:引物应与核酸序列数据【jù】库的【de】其它序列无明显同源【yuán】性。
引物量【liàng】:每条引物【wù】的浓度0.1~1umol或【huò】10~100pmol,以*引物量产生所需要的【de】结果为好,引物浓【nóng】度【dù】偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形【xíng】成二聚【jù】体的【de】机会。
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