短古柏线虫PCR检测试剂盒

产品信息：

产品名称：短古柏线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Cooperia curticeiPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶【róng】解液（tD）                                  毫升【shēng】

产品【pǐn】说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的物质主【zhǔ】要有【yǒu】五【wǔ】种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，短古柏线虫PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物【wù】的特异性【xìng】取决于引物与模【mó】板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模【mó】板DNA序列【liè】， 就能按【àn】其【qí】设计【jì】互补【bǔ】的寡核苷【gān】酸链做【zuò】引物，利用【yòng】PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则【zé】：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件下【xià】可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量【liàng】以9-22%为【wéi】宜，G+C太少扩【kuò】增效果不佳，G+C过多易出现【xiàn】非特异条带。ATGC*随机【jī】分【fèn】布【bù】，避免【miǎn】5个以上的嘌呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避免引物内部【bù】出现二【èr】级结构，避免两条引物间【jiān】互补，特别是【shì】3'端的互补【bǔ】，否则会形成引物二聚体，产生非【fēi】特异【yì】的扩【kuò】增【zēng】条【tiáo】带。

⑤引【yǐn】物3'端的碱基，特别是末及倒数【shù】第二个【gè】碱基，应严格要【yào】求配对【duì】，以避免因末端碱基不【bú】配对而【ér】导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能【néng】加上合适的酶切位【wèi】点【diǎn】， 被扩增的靶【bǎ】序列*有【yǒu】适宜的酶切位【wèi】点， 这对【duì】酶切分析或分子克隆【lóng】很【hěn】有【yǒu】好处。

⑦引物的【de】特异性：引物应与核【hé】酸序列【liè】数据【jù】库的其【qí】它【tā】序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物【wù】量产生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度偏高会引起【qǐ】错配和【hé】非特异性扩增，且可增加引物之间形【xíng】成二聚体【tǐ】的机会。