产品时间:2024-9-21
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产品介绍:
产品名称:马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒
英文【wén】名称:Equine Herpesvirus 1 (EHV1)1PCR
准备物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀【xī】释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升【shēng】
产品说明书【shū】 1份
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有【yǒu】五种即引【yǐn】物、酶【méi】、dNTP、模板和【hé】Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,马疱疹病毒1型PCR检测试剂盒PCR 产【chǎn】物的特异性取决【jué】于引物与模板DNA互补【bǔ】的程度。理论上【shàng】,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计【jì】互补的寡核【hé】苷酸链【liàn】做引物,利【lì】用PCR就可将模板DNA在【zài】体【tǐ】外大量扩增。设【shè】计引物应【yīng】遵【zūn】循以下【xià】原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度【dù】: 以【yǐ】200-500bp为宜,特定条【tiáo】件下可扩增长至10kb的片【piàn】段。
③引物碱【jiǎn】基:G+C含【hán】量以9-21%为宜,G+C太少扩增【zēng】效果不【bú】佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分【fèn】布,避免5个以上的嘌呤【lìng】或嘧啶【dìng】核苷酸的【de】成【chéng】串排列。
④避免引【yǐn】物内【nèi】部出现二级结构,避免两【liǎng】条【tiáo】引物【wù】间互补【bǔ】,特别【bié】是3'端的互补,否则会形成引物【wù】二聚体【tǐ】,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端【duān】的碱基,特别是【shì】末【mò】及倒数第二个碱基,应严格要求配对【duì】,以避免因末端碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或【huò】能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列【liè】*有【yǒu】适【shì】宜的酶切位【wèi】点, 这对酶【méi】切【qiē】分析或【huò】分子【zǐ】克隆很有好处。
⑦引物【wù】的特【tè】异性:引【yǐn】物应与核【hé】酸序【xù】列【liè】数据库的其它序列无明显同源性。
引物量【liàng】:每条引物【wù】的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量【liàng】产生所需要的结果为【wéi】好,引【yǐn】物浓【nóng】度偏高【gāo】会引【yǐn】起错配和非特异性【xìng】扩增,且【qiě】可增加引物之间形成二聚体的机会。
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