马疱疹病毒3型PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：马疱疹病毒3型PCR检测试剂盒

英文名【míng】称：Equine Herpesvirus 3 (EHV3)3PCR

准备物品：

清理【lǐ】液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微【wēi】升

稀释液（C）                                   毫【háo】升

溶【róng】解【jiě】液（tD）                                  毫升

产【chǎn】品说明【míng】书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反【fǎn】应的【de】物质主要有五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，马疱疹病毒3型PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取【qǔ】决于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的寡【guǎ】核苷酸链做引【yǐn】物【wù】，利用【yòng】PCR就【jiù】可【kě】将模板【bǎn】DNA在体外大量扩增。设【shè】计引物应遵循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件【jiàn】下可【kě】扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引【yǐn】物【wù】碱【jiǎn】基：G+C含量以9-21%为【wéi】宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳，G+C过多易【yì】出现非特异条【tiáo】带【dài】。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。

④避免引【yǐn】物【wù】内部出现二级结【jié】构，避免两条引【yǐn】物【wù】间互补，特别【bié】是3'端的互补【bǔ】，否则会形成引物【wù】二聚体，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱【jiǎn】基，特别是末及倒数第二个【gè】碱【jiǎn】基，应严【yán】格要求【qiú】配对，以避免【miǎn】因末【mò】端碱基不配对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物【wù】中有或能加上合适的酶【méi】切【qiē】位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜的酶【méi】切【qiē】位点【diǎn】， 这对酶切【qiē】分析或【huò】分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性【xìng】：引【yǐn】物应【yīng】与核酸序【xù】列数据库【kù】的其它【tā】序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要【yào】的结果【guǒ】为好，引物浓度偏高会【huì】引【yǐn】起错配和非【fēi】特异性扩增【zēng】，且可增加【jiā】引物之间【jiān】形成【chéng】二【èr】聚体的机【jī】会。