鹅裂口线虫PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：鹅裂口线虫PCR检测试剂盒

英文名称：Amidostomum anseriPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升【shēng】

溶解液（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参【cān】加PCR反应的物质【zhì】主要有【yǒu】五种即【jí】引【yǐn】物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，鹅裂口线虫PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物【wù】与模板【bǎn】DNA互补的程【chéng】度。理论上，只【zhī】要【yào】知道任何一段模板DNA序列， 就【jiù】能按其【qí】设计互补的【de】寡核苷酸链做【zuò】引物，利用【yòng】PCR就可【kě】将模板DNA在体外【wài】大量扩增。设计引物应【yīng】遵【zūn】循以下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引【yǐn】物扩增【zēng】跨度： 以200-500bp为宜，特【tè】定【dìng】条件下可扩【kuò】增长至10kb的片【piàn】段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-19%为【wéi】宜，G+C太少扩增效果不佳【jiā】，G+C过多易出【chū】现【xiàn】非【fēi】特异条带。ATGC*随机【jī】分布【bù】，避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避【bì】免引物内部出现二级结构，避免【miǎn】两条引物【wù】间互补，特别是【shì】3'端【duān】的互补，否则会形成【chéng】引物二聚体，产生非特异的扩增【zēng】条带。

⑤引物3'端的碱基，特【tè】别【bié】是末及倒数第二个碱基，应严【yán】格要【yào】求配对，以避免因【yīn】末端碱【jiǎn】基【jī】不配【pèi】对而导【dǎo】致PCR失败。

⑥引物中有【yǒu】或【huò】能加【jiā】上合【hé】适的酶切位点， 被扩增的【de】靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这对酶切【qiē】分析【xī】或【huò】分子克隆很有好处【chù】。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序【xù】列数据【jù】库的其【qí】它【tā】序列无明显同【tóng】源性【xìng】。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所【suǒ】需要的结果为好，引【yǐn】物浓【nóng】度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩增，且可增【zēng】加引【yǐn】物【wù】之【zhī】间形成二聚【jù】体的机会。