反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒

英文名称：Ehrlichia ruminantiumPCR

准备物品：

清理液（A）                                   毫【háo】升

染色液（t B）                                 微升

稀【xī】释液（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说【shuō】明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引【yǐn】物、酶、dNTP、模板【bǎn】和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，反刍兽埃立克体PCR检测试剂盒PCR 产物的特异【yì】性取决【jué】于引物与模【mó】板DNA互【hù】补的程【chéng】度【dù】。理论上，只要知道【dào】任何一段模板DNA序【xù】列， 就能【néng】按其设计互补【bǔ】的寡核苷【gān】酸【suān】链做引物，利用PCR就可【kě】将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵【zūn】循【xún】以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨【kuà】度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩【kuò】增长至10kb的片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-20%为【wéi】宜，G+C太【tài】少【shǎo】扩增效果【guǒ】不佳【jiā】，G+C过多【duō】易出【chū】现非特异条【tiáo】带。ATGC*随机分布，避免5个以上【shàng】的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列【liè】。

④避免引物内【nèi】部出现二级【jí】结构，避免两条引物【wù】间【jiān】互补，特【tè】别是3'端的互补【bǔ】，否则会形【xíng】成引物二【èr】聚体，产生非特异的扩增条带【dài】。

⑤引物3'端的碱【jiǎn】基，特别是末及倒【dǎo】数第二个碱基【jī】，应严【yán】格要【yào】求配对【duì】，以避【bì】免因末端碱基不配对【duì】而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加【jiā】上合适【shì】的【de】酶切位点， 被【bèi】扩增的【de】靶序列*有适宜的【de】酶【méi】切位点， 这对【duì】酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的【de】特异性：引物应【yīng】与核酸序【xù】列数据库的其【qí】它序列无明显【xiǎn】同源性【xìng】。

引物量：每【měi】条引物的【de】浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物【wù】量产生所【suǒ】需要【yào】的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性【xìng】扩【kuò】增，且可增加引物【wù】之间形成二聚【jù】体的【de】机会