产品时间:2024-9-20
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产品介绍:
产品名称:放线共生放线杆菌PCR检测试剂盒
英文名称【chēng】:Aggregatibacter actinomycetemcomitans PCR
准备物品:
清【qīng】理液(A) 毫升
染色【sè】液【yè】(t B) 微升
稀释液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升【shēng】
产品说明【míng】书 1份【fèn】
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
反应五要素:
参加PCR反应的【de】物质主要有【yǒu】五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,放线共生放线杆菌PCR检测试剂盒PCR 产物【wù】的特异性取决于引物与模板【bǎn】DNA互补的程度。理【lǐ】论【lùn】上,只要知道任何【hé】一段模板【bǎn】DNA序【xù】列, 就【jiù】能按【àn】其设计互补的【de】寡核【hé】苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增【zēng】。设计引物【wù】应遵循以下原【yuán】则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引【yǐn】物扩增【zēng】跨【kuà】度【dù】: 以200-500bp为宜,特定条件【jiàn】下可【kě】扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以9-20%为宜,G+C太【tài】少扩【kuò】增效果不佳,G+C过多易【yì】出现非特异【yì】条带。ATGC*随机分布【bù】,避免5个【gè】以上的嘌呤【lìng】或【huò】嘧啶核苷【gān】酸的成【chéng】串【chuàn】排【pái】列。
④避免引物内部出【chū】现二级结构【gòu】,避免两条引物间互补【bǔ】,特【tè】别是3'端的【de】互补,否则会形【xíng】成【chéng】引物二聚体,产生【shēng】非【fēi】特异的扩【kuò】增条带。
⑤引物3'端的碱基【jī】,特别【bié】是末及倒数【shù】第二个碱基,应严格要求【qiú】配对,以【yǐ】避免因末端【duān】碱基不配对而导【dǎo】致PCR失【shī】败。
⑥引物【wù】中有或能加上合适的【de】酶切位点, 被扩增的靶序【xù】列*有【yǒu】适宜的【de】酶切位点【diǎn】, 这对酶切分析或【huò】分子【zǐ】克隆很有好处。
⑦引物的特【tè】异性:引物应与核【hé】酸序列数据库的其【qí】它序列无明【míng】显同源性【xìng】。
引物量:每条引物【wù】的【de】浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所【suǒ】需【xū】要的结果【guǒ】为好【hǎo】,引物浓度偏高会【huì】引起【qǐ】错配和非特异性扩增,且可增加【jiā】引物之间形成二聚体的机【jī】会。
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