放线菌属通用PCR检测试剂盒

产品信息：

产品名称：放线菌属通用PCR检测试剂盒

英文名称：Actinomyces spp.PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书【shū】                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主【zhǔ】要有五种即【jí】引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，放线菌属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性【xìng】取决于引物与模板DNA互补的程度【dù】。理论上【shàng】，只要知道任何【hé】一【yī】段模【mó】板【bǎn】DNA序列【liè】， 就能按其设计互补的寡核苷【gān】酸链做引物，利用PCR就可将模【mó】板DNA在体【tǐ】外大【dà】量【liàng】扩增。设【shè】计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定【dìng】条【tiáo】件下可扩【kuò】增长至10kb的片段【duàn】。

③引物碱【jiǎn】基【jī】：G+C含量以9-20%为宜，G+C太少扩增效【xiào】果不佳【jiā】，G+C过多易出【chū】现非特异条带。ATGC*随机分布，避免【miǎn】5个以上【shàng】的嘌呤或【huò】嘧啶核苷酸的成串排【pái】列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条【tiáo】引物【wù】间互补【bǔ】，特别【bié】是3'端的互补，否则会形成引物二聚【jù】体，产【chǎn】生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是【shì】末及【jí】倒数第二个【gè】碱基【jī】，应严格要求配对【duì】，以避【bì】免因末端碱基不【bú】配对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中有或【huò】能加上【shàng】合适的酶【méi】切位点， 被【bèi】扩增【zēng】的靶序列【liè】*有【yǒu】适宜的酶切位点【diǎn】， 这对酶切分析或分子克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物【wù】的特【tè】异性：引物应与【yǔ】核酸序列数据库的其它序列无明【míng】显同源【yuán】性。

引物量：每【měi】条引物的浓度【dù】0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量【liàng】产【chǎn】生所需要的结果为【wéi】好，引物浓度偏高会引起错配【pèi】和非特异性扩【kuò】增【zēng】，且【qiě】可【kě】增加引物【wù】之间形成二聚体的机会。