马疱疹病毒通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：马疱疹病毒通用PCR检测试剂盒

英【yīng】文名称：Equine Herpesvirus(EHV)PCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升【shēng】

染色【sè】液（t B）                                 微升

稀释【shì】液（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品【pǐn】说明书                                     1份【fèn】

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有【yǒu】五种【zhǒng】即引物、酶、dNTP、模板【bǎn】和【hé】Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，马疱疹病毒通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于【yú】引物【wù】与模板DNA互【hù】补的程度。理【lǐ】论上，只要知道【dào】任何一段模板DNA序列， 就能按其设【shè】计【jì】互补的寡【guǎ】核【hé】苷酸链【liàn】做引物，利用PCR就可将【jiāng】模板DNA在体【tǐ】外大量扩增。设计引物应遵循以下【xià】原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩【kuò】增跨度【dù】： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至【zhì】10kb的片【piàn】段【duàn】。

③引物碱基【jī】：G+C含量以9-21%为【wéi】宜，G+C太少扩【kuò】增效果【guǒ】不佳，G+C过多易【yì】出【chū】现【xiàn】非特异条带。ATGC*随【suí】机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串【chuàn】排列。

④避免【miǎn】引物内部出现二级结构【gòu】，避免两条【tiáo】引物间互【hù】补，特别是3'端的互补，否【fǒu】则会形【xíng】成引物二聚体【tǐ】，产生非特【tè】异的【de】扩增条带。

⑤引物3'端【duān】的碱【jiǎn】基，特【tè】别是末及倒数【shù】第【dì】二【èr】个碱基，应严格【gé】要求配对，以避免因末端碱基不配【pèi】对而导致PCR失败【bài】。

⑥引物中有或能加上【shàng】合适的酶【méi】切位【wèi】点， 被扩增【zēng】的靶序【xù】列*有适宜的【de】酶切位点， 这对酶切分析或【huò】分子克隆很【hěn】有好处。

⑦引物的特异性【xìng】：引物应与核酸序【xù】列数【shù】据库【kù】的其它序列无明显【xiǎn】同源【yuán】性。

引物【wù】量【liàng】：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物【wù】量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会【huì】引起错配【pèi】和非特异性扩增，且可增加【jiā】引【yǐn】物之间形成二聚体【tǐ】的【de】机会。