登革病毒通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：登革病毒通用PCR检测试剂盒

英文名称：Dengue Virus(DENV)RTPCR

准备物品：

清【qīng】理液（A）                                   毫升

色液（t B）                                   微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液【yè】（tD）                                  毫升

产品说明书【shū】                                    1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加【jiā】PCR反应的【de】物质【zhì】主要有五种即引物、酶【méi】、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，登革病毒通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决【jué】于引物【wù】与模板【bǎn】DNA互补的程度。理【lǐ】论【lùn】上【shàng】，只要知道任何一段【duàn】模【mó】板DNA序列， 就能按其设计互补【bǔ】的寡核苷酸链做引物，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在【zài】体【tǐ】外大【dà】量扩增【zēng】。设计引物应遵【zūn】循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定条【tiáo】件【jiàn】下可扩增长至10kb的【de】片【piàn】段。

③引【yǐn】物碱基：G+C含量以9-21%为【wéi】宜【yí】，G+C太少扩增效【xiào】果【guǒ】不佳【jiā】，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以【yǐ】上的【de】嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级【jí】结构，避免两条引【yǐn】物间【jiān】互补，特别是3'端【duān】的互补，否【fǒu】则会【huì】形成引【yǐn】物二【èr】聚体，产生【shēng】非特【tè】异的扩增条带。

⑤引物【wù】3'端的【de】碱基，特【tè】别是末及倒数第【dì】二个碱【jiǎn】基，应严格要【yào】求配对【duì】，以避免因末端碱基【jī】不配【pèi】对而导致PCR失败。

⑥引物【wù】中【zhōng】有或能加上合适的酶【méi】切位【wèi】点， 被扩增的靶【bǎ】序列*有【yǒu】适宜的【de】酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有【yǒu】好处。

⑦引物的特异性：引【yǐn】物【wù】应与核酸序列数据库的其【qí】它序列【liè】无明【míng】显同源性。

引物【wù】量：每条引物的浓度0.1～1umol或【huò】10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为【wéi】好，引物浓【nóng】度偏【piān】高会引【yǐn】起错配和非【fēi】特异性【xìng】扩【kuò】增【zēng】，且可增加引【yǐn】物之间形成二【èr】聚体的机会。