多食棘阿米巴属通用PCR检测试剂盒

产品介绍：

产品名称：多食棘阿米巴属通用PCR检测试剂盒

英文名称：Acanthamoeba spp.PCR

准备物品：

清理液【yè】（A）                                   毫升

染色液【yè】（t B）                                 微升

稀释液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升【shēng】

产【chǎn】品说【shuō】明书                                     1份

注意事项：

1．基础程序；

2．扩增温度和延伸温度；

3．反应时间；

4．循环次数；

5．PCR 反应液的配制；

6．PCR技术的基本原理；

7．PCR的反应动力学；

8．PCR扩增产物；

9．PCR反应体系与反应条件。

反应五要素：

参加PCR反应的【de】物【wù】质主要有五种即引物、酶、dNTP、模【mó】板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，多食棘阿米巴属通用PCR检测试剂盒PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的【de】程度【dù】。理论上，只要知道任何一段【duàn】模板DNA序列， 就能按其设计【jì】互补的【de】寡核苷酸【suān】链做【zuò】引【yǐn】物，利用PCR就【jiù】可将模板DNA在体外大量扩【kuò】增。设【shè】计引物【wù】应遵循以【yǐ】下原【yuán】则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物【wù】扩增【zēng】跨【kuà】度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增【zēng】长至10kb的片段。

③引物碱基【jī】：G+C含量以【yǐ】9-22%为宜，G+C太少扩增效果不【bú】佳，G+C过【guò】多易出现非【fēi】特异条带。ATGC*随机分【fèn】布，避免5个以上的嘌【piào】呤或嘧啶【dìng】核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别【bié】是3'端的互补，否【fǒu】则会【huì】形【xíng】成引物【wù】二聚体，产【chǎn】生【shēng】非特异的扩增条【tiáo】带。

⑤引物【wù】3'端的碱基【jī】，特别是末及倒数第二个碱基，应【yīng】严格【gé】要求配对【duì】，以避免因末端碱【jiǎn】基不配对而导致PCR失【shī】败。

⑥引物【wù】中有或能加上合【hé】适【shì】的酶切位点【diǎn】， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切【qiē】位点， 这【zhè】对酶切分析【xī】或分子克【kè】隆很有好处。

⑦引物的特【tè】异性：引物应【yīng】与核酸序列数【shù】据【jù】库的其它【tā】序列无明显同源性。

引物量：每【měi】条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需【xū】要的结果为好，引物【wù】浓度【dù】偏【piān】高【gāo】会引起错配和非特异性【xìng】扩【kuò】增【zēng】，且可增【zēng】加引物之间形成二聚体的机会【huì】。