在【zài】ELISA实验【yàn】中我们经常【cháng】会碰到试剂盒【hé】变质的问题,是什【shí】么原因导致【zhì】了ELISA试剂盒的变质呢?接【jiē】下来【lái】我就和大家说一说导【dǎo】致ELISA试剂【jì】盒变质的【de】原因有【yǒu】哪些。
导致ELISA试剂盒变质的原因主要分为七种:
1、方法学的影响
ELISA测定模【mó】式【shì】包【bāo】括以下几种:双抗体夹心法、间【jiān】接【jiē】法、双抗原夹心法、IgM抗体【tǐ】捕捉法、竞【jìng】争抑制【zhì】法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采【cǎi】用)因受操作时差所【suǒ】引起的bu公平竞争等因素【sù】的【de】影响,结果重复性较差,质量较难控制【zhì】。
2、试剂因素
不同批次的ELISA试【shì】剂在制作过程中【zhōng】很难保证质量一致【zhì】,即使是通过批检的项【xiàng】目其检测结果也会存在差异,因此【cǐ】必须选择和订【dìng】购长【zhǎng】批号【hào】的试剂,并保证保存【cún】条件。 严格执行这【zhè】一标准可以避免【miǎn】因试【shì】剂批号改变【biàn】而重【chóng】新建立【lì】质控【kòng】体系及重新评估试【shì】剂的复【fù】杂【zá】过程,并且能够保证结【jié】果的稳【wěn】定性;对于效期短、使用【yòng】率低的【de】试剂,应当小量分装,每【měi】次使【shǐ】用则【zé】取分装部分【fèn】即可,避免反复【fù】冻融【róng】造成试剂的失效【xiào】。
3、样本因素
标本【běn】干扰【rǎo】因素包【bāo】括内源性干扰因素和外源性干扰【rǎo】因【yīn】素,前者包【bāo】括类风湿【shī】因子、补体、异嗜性抗【kàng】体【tǐ】、自身抗【kàng】体、等,后者包括标本【běn】溶【róng】血、标本被【bèi】细菌污染、标本贮【zhù】存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的【de】反复冻【dòng】融等。
4、操作因素
ELISA操作步【bù】骤【zhòu】复杂,操作不当将引起较大的误差【chà】。加样、温育、洗涤、显色、比色【sè】。
5、标本复查
ELISA手【shǒu】工检测过程复杂,影响因素较多,即使室【shì】内质控在控,也可【kě】能【néng】因孔间差【chà】异【yì】而【ér】造【zào】成结果【guǒ】的差异,因此加大【dà】复查力度是保证结果准【zhǔn】确性的可靠方法。
6、表示结果的常用方法
①定性测定。
②半定量测定,结果一般以滴度表示。
③定量测定,即【jí】用已知【zhī】量的标准【zhǔn】品作【zuò】一系列稀【xī】释后进行【háng】ELISA测定,绘制标【biāo】准曲线,结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反【fǎn】应板都【dōu】必须绘制相应的【de】标准【zhǔn】曲【qǔ】线。