酶联生物免疫学检【jiǎn】验的各领域【yù】中的ELISA试剂【jì】盒，有着灵敏度高【gāo】、特异性强、经【jīng】济性【xìng】较好等优点，酶【méi】联生物的ELISA试剂【jì】盒在所有产【chǎn】品中销量是高的【de】，本公司ELISA试剂盒仅用于【yú】科研，不用于【yú】临床。在实验【yàn】过程中肯定会【huì】有很多【duō】科研朋友是不懂的，今天就给【gěi】大家【jiā】介绍一下【xià】ELISA试剂盒【hé】的使用方法。

一：实验操作程序简述

1. 准备试剂，样品和标准品；

2. 加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟；

3. 洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟；

4. 加入终止液；

5. 15分钟之内度OD值；

二：包被的条件

包被【bèi】用【yòng】抗【kàng】原或抗体的【de】浓【nóng】度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料【liào】的性质而【ér】选定。ELISA试剂盒【hé】抗【kàng】体和蛋白质抗原一般【bān】采用pH9.6的碳酸【suān】盐缓冲液作为稀释液，也【yě】有用pH7.2的磷酸【suān】盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作【zuò】为稀释【shì】液的。

通常在ELISA板孔【kǒng】中加入包被【bèi】液后，在9-20℃冰【bīng】箱中放置放置一个晚上，37℃中保温2小时【shí】被认【rèn】为具有同等的【de】包被效果【guǒ】。包被的【de】适当浓度随载体和包被物的性质【zhì】可有【yǒu】很大的【de】变化，每批【pī】材料需【xū】通过实验与酶结合物的浓度【dù】协调选定。一【yī】般蛋【dàn】白质【zhì】的包被浓度【dù】为100ng/ml-20ug/ml。

三：竞争法测抗原

小【xiǎo】分【fèn】子抗【kàng】原或半抗原因缺【quē】乏可【kě】作夹【jiá】心【xīn】法【fǎ】的两个以上的【de】位点，因此不【bú】能用双【shuāng】抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模【mó】式。其原理是标【biāo】本中【zhōng】的抗原和一定量【liàng】的酶标抗原【yuán】竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多【duō】，结【jié】合在【zài】固相【xiàng】上的酶标抗原愈少，zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

四：抗原和抗体

制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与【yǔ】酶联结时其他杂蛋白【bái】的干扰。用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物【wù】均具有特异的【de】免疫【yì】活性，可【kě】以在高【gāo】稀释度进行反应，实验结果本【běn】底【dǐ】浅【qiǎn】淡【dàn】。如【rú】用【yòng】F(ab')2进行标记，则更可避免标本中【zhōng】RF的干扰【rǎo】。

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