动物细胞培养的必需条件:
在所有的细【xì】胞离体培养【yǎng】中,最【zuì】困难的【de】是动物【wù】细胞培养【yǎng】。下面是它所需要的特殊条件【jiàn】。
⑴血清【qīng】:动物细【xì】胞离体培养【yǎng】常常需要【yào】血清。常用的是【shì】小牛血清。血清提供生【shēng】长必需因【yīn】子【zǐ】,如激素、微量元素、矿【kuàng】物质【zhì】和脂【zhī】肪。在这【zhè】里,血清等于是动物细【xì】胞离体培养【yǎng】的天然营养液【yè】。
⑵支持物【wù】:大多数动物细胞有贴壁生长的习【xí】惯。离【lí】体培【péi】养常用【yòng】玻璃,塑【sù】料等【děng】作为支持物。
⑶气体【tǐ】交换:二氧【yǎng】化碳和氧【yǎng】气【qì】的比例要在细胞培养过程【chéng】中【zhōng】不断进【jìn】行调节,不断维持所需要【yào】的气体【tǐ】条件。
动物细胞培养的培养步骤:
注:所【suǒ】有步骤应在无菌无毒的超净工作台【tái】进行。蛋【dàn】白酶处理时间不【bú】宜过【guò】长【zhǎng】。
取【qǔ】离体【tǐ】的【de】动物组【zǔ】织,器官或【huò】细胞,剪碎并【bìng】加入yi蛋白酶分解成单【dān】个细胞,配置形成细胞悬液。
制备动物细胞培养液体培【péi】养基(需【xū】加【jiā】入【rù】血清,保证无菌无毒),将细【xì】胞【bāo】接种至培养基,放入二氧化【huà】碳培养箱中【zhōng】进行初【chū】代【dài】培养。
当细胞增殖达【dá】到一【yī】定【dìng】程度,出现接触抑制现象时,用yi蛋白酶再次处理,并用【yòng】细胞悬【xuán】液吹打【dǎ】贴【tiē】壁生长的细胞【bāo】。进行细胞【bāo】计数。
依照计数结果,分瓶培养,进行传代培养。获得细胞系或细胞株。