人羟基吲哚一氧一甲基转移酶(HIOMT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

5pg/ml-200pg/ml

使用目的：

本试剂【jì】盒用于测定【dìng】人血清、血浆【jiāng】及相关液体【tǐ】样本中羟基吲哚一氧【yǎng】一【yī】甲基转移酶(HIOMT)含量。

人羟基吲哚一氧一甲基转移酶(HIOMT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本【běn】试剂盒应【yīng】用双【shuāng】抗体【tǐ】夹【jiá】心法测定标本中人羟基【jī】吲【yǐn】哚【duǒ】一氧【yǎng】一甲基转【zhuǎn】移酶(HIOMT)水平。用纯化的【de】人羟基【jī】吲哚一氧一甲基转移酶(HIOMT)抗【kàng】体包被微孔【kǒng】板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入羟基吲【yǐn】哚一氧【yǎng】一甲基转移酶(HIOMT)，再与HRP标记的羟基【jī】吲哚一氧一【yī】甲基【jī】转移酶(HIOMT)抗体结【jié】合，形成抗体-抗原-酶【méi】标抗体复合【hé】物，经过*洗涤【dí】后加底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色【sè】，并在酸的作用下转化成终的。颜色的【de】深浅和样品中【zhōng】的羟基吲哚【duǒ】一氧一甲基转移酶(HIOMT)呈正相关。用【yòng】酶【méi】标仪在450nm波【bō】长下测定吸光度【dù】（OD值），通过标【biāo】准曲线计算样品中人羟基吲【yǐn】哚【duǒ】一氧一甲基转移【yí】酶【méi】(HIOMT)浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采【cǎi】集后尽【jìn】早进行提【tí】取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行【háng】实验。若不能马上进行试验，可【kě】将【jiāng】标本放于【yú】-20℃保存，但应【yīng】避免反【fǎn】复冻融

2．不【bú】能【néng】检测含NaN3的【de】样品，因NaN3抑制辣根过氧化物【wù】酶的（HRP）活性。

人羟基吲哚一氧一甲基转移酶(HIOMT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀释：本试【shì】剂盒提供【gòng】原倍标准品【pǐn】一支，用户可按照下【xià】列图【tú】表在小试管【guǎn】中进行稀【xī】释。

加样：分别设空【kōng】白孔（空白对照孔不加样品【pǐn】及【jí】酶标试剂，其余各步操【cāo】作相同【tóng】）、标准孔、待测样品孔。在酶标包【bāo】被板上标准品准【zhǔn】确加样【yàng】50μl，待测样品孔【kǒng】中先加【jiā】样品稀释液40μl，然后再加待测【cè】样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样【yàng】将样品【pǐn】加于酶标【biāo】板孔底部，尽量不【bú】触及孔【kǒng】壁，轻【qīng】轻晃动【dòng】混匀。
温【wēn】育：用封板膜封【fēng】板后置37℃温育30分【fèn】钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小【xiǎo】心【xīn】揭掉封板膜，弃去液【yè】体，甩干，每孔加满【mǎn】洗涤液，静【jìng】置30秒后弃去，如【rú】此重复5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先【xiān】加【jiā】入显色剂A50μl，再【zài】加入显色【sè】剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显【xiǎn】色10分【fèn】钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空调零【líng】，450nm波长【zhǎng】依序测【cè】量【liàng】各【gè】孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液【yè】后【hòu】15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总结：

计算

  以标【biāo】准物【wù】的浓度【dù】为【wéi】横【héng】坐标【biāo】，OD值为纵坐标，在坐标纸上【shàng】绘出标准曲【qǔ】线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再【zài】乘以【yǐ】稀释倍数；或用标【biāo】准物的浓度与【yǔ】OD值计算出【chū】标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算【suàn】出样品浓度，再乘以稀【xī】释倍数【shù】，即【jí】为样品的【de】实际浓【nóng】度。

人羟基吲哚一氧一甲基转移酶(HIOMT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在【zài】室温【wēn】平衡【héng】9-21分钟后方【fāng】可使用，酶【méi】标【biāo】包被板开封后如未用【yòng】完，板条应装入密【mì】封【fēng】袋中保存。

2．浓洗涤【dí】液可能【néng】会有结【jié】晶析出，稀释时可在水浴中加【jiā】温助溶，洗涤时【shí】不【bú】影响结果。

3．各【gè】步【bù】加样均应使用【yòng】加样【yàng】器，并经常【cháng】校对其【qí】准确【què】性，以避免试【shì】验误差【chà】。一次加样时间控制在5分钟内，如标本【běn】数量多，推荐使【shǐ】用排枪加样。

请每【měi】次测定的【de】同时做标准【zhǔn】曲线，做复孔【kǒng】。如标【biāo】本【běn】中【zhōng】待测物质含量过高【gāo】（样本OD值大于标准品孔【kǒng】孔的OD值），请先用样品【pǐn】稀释液稀【xī】释一定【dìng】倍数（n倍）后再测定，计算时请【qǐng】后乘以总稀释倍数【shù】（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进【jìn】行【háng】，试【shì】验结果判定【dìng】必须以酶标【biāo】仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月