人β-隐黄质酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

16pg/ml-550pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定玉米样本中β-隐黄质含量。

人β-隐黄质酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试【shì】剂盒应【yīng】用双抗【kàng】体夹心法测定【dìng】标本中β-隐黄【huáng】质水平。用纯【chún】化的β-隐黄【huáng】质抗体【tǐ】包被微孔【kǒng】板，制成固【gù】相抗体【tǐ】，往包被单抗的【de】微孔中依次加入β-隐黄质，再【zài】与HRP标记的β-隐黄质抗体结【jié】合，形成抗体-抗【kàng】原【yuán】-酶标抗体复合物【wù】，经过*洗涤后加底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化【huà】下转化【huà】成蓝色，并在酸的作【zuò】用下转化成终【zhōng】的。颜色的深浅和【hé】样品中的β-隐黄质呈正相关。用酶标仪在450nm波【bō】长下测【cè】定吸【xī】光度（OD值），通过标准曲线计算样品中β-隐黄质浓【nóng】度【dù】。

试剂盒组成

标本要求 

1．标【biāo】本采集【jí】后尽早进行提【tí】取，提【tí】取按相关文献进行，提【tí】取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于【yú】-20℃保【bǎo】存【cún】，但【dàn】应避免反复【fù】冻融【róng】

2．不【bú】能检测含NaN3的【de】样品，因【yīn】NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

人β-隐黄质酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准品的稀释【shì】：本【běn】试剂【jì】盒提供原倍标准品一支【zhī】，用户可按照下列图表在小试管中进行稀【xī】释。

加样：分【fèn】别设空白孔（空白对照孔不加【jiā】样【yàng】品及酶标【biāo】试剂，其余各步操作相同）、标准【zhǔn】孔、待测样【yàng】品孔【kǒng】。在酶【méi】标包被板上标准【zhǔn】品准【zhǔn】确【què】加样50μl，待测样品孔中先加【jiā】样品【pǐn】稀释液40μl，然后【hòu】再加【jiā】待【dài】测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶标板【bǎn】孔底部，尽量不触【chù】及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜【mó】封【fēng】板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小【xiǎo】心揭掉【diào】封板膜，弃去【qù】液体，甩【shuǎi】干，每孔加满洗【xǐ】涤液，静置30秒后弃去，如此重复【fù】5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色【sè】：每孔先加入显色剂A50μl，再【zài】加入显色剂B50μl，轻轻【qīng】震荡混匀，37℃避光显色10分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空调【diào】零，450nm波长依序【xù】测量【liàng】各【gè】孔【kǒng】的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内【nèi】进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓【nóng】度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘【huì】出标准曲【qǔ】线，根据样品的OD值由标准曲【qǔ】线查【chá】出相应【yīng】的浓度；再乘以稀【xī】释倍数；或【huò】用【yòng】标准物的浓度与OD值【zhí】计算【suàn】出【chū】标准曲线【xiàn】的直线回归方程式，将【jiāng】样品的OD值代入方【fāng】程式，计算出样品浓【nóng】度，再乘以稀【xī】释倍数，即为样品【pǐn】的实际【jì】浓度。

人β-隐黄质酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室【shì】温平衡9-21分钟后方可使用，酶【méi】标包被板【bǎn】开封后如未用【yòng】完，板【bǎn】条【tiáo】应装【zhuāng】入密封袋中【zhōng】保【bǎo】存。

2．浓洗涤液可能会有结晶【jīng】析出，稀释时可在水浴中加温助溶【róng】，洗涤时不影【yǐng】响结【jié】果。

3．各步加样均应使用【yòng】加样器，并【bìng】经常校对其准确【què】性，以避免试验误差。一次加【jiā】样时【shí】间控【kòng】制在【zài】5分钟【zhōng】内，如标本数【shù】量多，推【tuī】荐使用排枪加样。

请【qǐng】每次测定的【de】同时做标【biāo】准曲线，做复孔。如标【biāo】本中待【dài】测物质含量过【guò】高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值），请先用样【yàng】品稀释液稀释一【yī】定倍数（n倍）后再测定，计算【suàn】时【shí】请后乘【chéng】以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说【shuō】明书的【de】操作进行，试验结【jié】果判定必须【xū】以酶标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月