犬二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

0.6U/ml -16U/ml

使用目的：

本试剂盒用于【yú】测定犬血清、血浆及相关液体样本【běn】中【zhōng】二胺【àn】氧【yǎng】化酶(DAO)含【hán】量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标【biāo】本【běn】中犬二胺氧化酶(DAO)水平【píng】。用纯化【huà】的犬二胺氧【yǎng】化酶(DAO)抗体【tǐ】包被微孔板【bǎn】，制【zhì】成固相抗【kàng】体，往包被单抗【kàng】的【de】微孔中依次加入【rù】二胺氧化酶(DAO)，再与HRP标记的二胺【àn】氧化酶(DAO)抗体结合，形成抗体-抗原【yuán】-酶【méi】标抗体复合物，经过*洗涤后加【jiā】底【dǐ】物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化【huà】成蓝色，并在【zài】酸的作用下转化成终的。颜色的【de】深浅和样品中的二胺氧化【huà】酶(DAO)呈正相关【guān】。用酶标【biāo】仪在【zài】450nm波长【zhǎng】下测定吸光度（OD值），通过标【biāo】准曲线计【jì】算样品中犬二胺氧化酶【méi】(DAO)浓【nóng】度。

犬二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析试剂盒试剂盒组成

标本要求 

1．标【biāo】本采集后尽早进【jìn】行提取【qǔ】，提取按【àn】相【xiàng】关文献进行【háng】，提取后应尽【jìn】快进行实验。若不能马上进行【háng】试验【yàn】，可将标【biāo】本放于-20℃保【bǎo】存，但应避【bì】免反复冻融

2．不【bú】能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根【gēn】过氧化物酶的【de】（HRP）活【huó】性【xìng】。

操作步骤

标【biāo】准品的【de】稀释：本试剂盒提供原【yuán】倍标准品一支，用户可按照【zhào】下列【liè】图表在小试管中【zhōng】进【jìn】行稀释。

加样：分别设空白【bái】孔【kǒng】（空白对【duì】照孔【kǒng】不加样品【pǐn】及【jí】酶标试剂，其余各步【bù】操作【zuò】相同）、标准孔、待测样品孔【kǒng】。在酶【méi】标包被板上标准品准确加样【yàng】50μl，待测样【yàng】品孔中先加样品稀【xī】释【shì】液40μl，然后再加【jiā】待【dài】测样品10μl（样品终稀释【shì】度为5倍【bèi】）。加样将样品加于【yú】酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻【qīng】轻晃动混匀。
温育：用封板膜【mó】封【fēng】板【bǎn】后置37℃温育30分钟【zhōng】。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静【jìng】置【zhì】30秒后弃【qì】去，如此重【chóng】复【fù】5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂【jì】A50μl，再加入显【xiǎn】色剂B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀，37℃避光显【xiǎn】色【sè】10分【fèn】钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定【dìng】：以空【kōng】白空调零【líng】，450nm波【bō】长依序测量各孔【kǒng】的【de】吸光【guāng】度【dù】（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以【yǐ】标准物的浓度为横【héng】坐标，OD值【zhí】为纵坐标，在【zài】坐【zuò】标【biāo】纸上【shàng】绘出标【biāo】准曲线，根据样品的【de】OD值由标准曲线查出相应的浓度；再【zài】乘以稀释倍数【shù】；或【huò】用标准物的【de】浓度与OD值计算出标准曲线的【de】直线回归方【fāng】程式，将样品【pǐn】的OD值代【dài】入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍【bèi】数，即为样品的实际浓【nóng】度【dù】。

犬二胺氧化酶(DAO)酶联免疫分析试剂盒注意事项

1．试【shì】剂盒【hé】从冷藏环境【jìng】中取【qǔ】出应在室温平衡9-21分钟后方【fāng】可使用，酶标包被【bèi】板开【kāi】封后【hòu】如【rú】未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗【xǐ】涤液可能会有结晶析出【chū】，稀释时可在【zài】水【shuǐ】浴【yù】中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步【bù】加样【yàng】均应【yīng】使用加样器，并【bìng】经常【cháng】校对其准确性，以避免【miǎn】试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加【jiā】样。

请每次测定的同时做【zuò】标准曲【qǔ】线【xiàn】，做复孔。如标本【běn】中待测物【wù】质【zhì】含量【liàng】过高（样本OD值大【dà】于【yú】标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液【yè】稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算【suàn】时请后乘【chéng】以【yǐ】总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说明书的【de】操作进行，试验结果判定【dìng】必须以酶标仪【yí】读数为【wéi】准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月