人肌醇（inositol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

1.2 pg/ml – 65pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定奶粉样本中肌醇（inositol）含量。

人肌醇（inositol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心【xīn】法测定标本【běn】中肌醇（inositol）水【shuǐ】平。用纯化【huà】的肌醇【chún】（inositol）抗【kàng】体包【bāo】被【bèi】微孔板，制【zhì】成固相抗【kàng】体【tǐ】，往包被单抗的微孔中依【yī】次加入【rù】肌醇（inositol），再与HRP标记的肌醇（inositol）抗体结合，形成抗体-抗【kàng】原-酶标抗【kàng】体复合物【wù】，经过*洗涤后【hòu】加【jiā】底【dǐ】物TMB显色。TMB在HRP酶的催【cuī】化下转化成蓝色，并【bìng】在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和【hé】样【yàng】品中的肌醇（inositol）呈正相关。用酶【méi】标【biāo】仪在450nm波【bō】长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线【xiàn】计算样品中肌【jī】醇（inositol）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本【běn】采集后尽早进【jìn】行提取，提取按相关文献进行【háng】，提取后应尽【jìn】快进【jìn】行实验。若【ruò】不【bú】能马上进行试【shì】验【yàn】，可将标本【běn】放于【yú】-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含【hán】NaN3的样【yàng】品，因NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物【wù】酶【méi】的（HRP）活性。

人肌醇（inositol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准【zhǔn】品的稀释【shì】：本试剂盒提【tí】供原倍标准【zhǔn】品一支，用户可【kě】按照下【xià】列图表在小试【shì】管中进行稀释【shì】。

加样：分别设【shè】空白孔（空【kōng】白对照孔不【bú】加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准【zhǔn】孔、待【dài】测样品孔【kǒng】。在【zài】酶标包【bāo】被板上【shàng】标准品准确加样【yàng】50μl，待测样品孔【kǒng】中先加【jiā】样品稀释【shì】液40μl，然后再加待测样品【pǐn】10μl（样品【pǐn】终稀释度为5倍）。加样将样品加【jiā】于酶【méi】标板孔底部，尽【jìn】量不触及孔壁，轻轻【qīng】晃【huǎng】动混匀【yún】。

温育【yù】：用封板膜封板后置37℃温【wēn】育30分【fèn】钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭掉【diào】封板【bǎn】膜，弃去液体，甩干，每【měi】孔加满洗涤【dí】液【yè】，静置【zhì】30秒后【hòu】弃去【qù】，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每【měi】孔先加入显【xiǎn】色剂A50μl，再【zài】加入显【xiǎn】色剂B50μl，轻【qīng】轻震荡混匀【yún】，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白【bái】空调【diào】零，450nm波长依【yī】序测【cè】量各孔的【de】吸光度（OD值）。 测定应在加终【zhōng】止液后【hòu】15分钟【zhōng】以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓【nóng】度【dù】为横坐标，OD值为纵【zòng】坐标，在【zài】坐标纸上绘出标准曲【qǔ】线【xiàn】，根据样品的OD值由标准曲线查出【chū】相应的浓度；再乘以【yǐ】稀释倍数【shù】；或用【yòng】标准物的浓度与OD值计算出标【biāo】准曲线的直线回归方程式，将【jiāng】样品的OD值代入【rù】方程【chéng】式【shì】，计算出样品浓度，再乘【chéng】以【yǐ】稀释【shì】倍数，即【jí】为【wéi】样品的实际浓度。

人肌醇（inositol）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境【jìng】中取出应在【zài】室温【wēn】平【píng】衡9-20分钟后【hòu】方可使用，酶标包被板开封后如未用【yòng】完，板【bǎn】条【tiáo】应装入密封袋中保存【cún】。

2．浓【nóng】洗涤液可能会有【yǒu】结晶析出，稀释时可【kě】在水浴中加温助溶，洗【xǐ】涤时【shí】不影【yǐng】响结果。

3．各步加样均【jun1】应【yīng】使用加样器，并【bìng】经常校对其【qí】准确性，以避免【miǎn】试验误【wù】差。一次加样时间控制在5分钟内【nèi】，如标本【běn】数量【liàng】多【duō】，推荐使用【yòng】排枪加样。

请每次测定的同时做标【biāo】准【zhǔn】曲线，做复孔。如标本中待测物质【zhì】含量过高（样本OD值大于标【biāo】准【zhǔn】品【pǐn】孔孔【kǒng】的OD值），请【qǐng】先【xiān】用样品稀释液稀释一定【dìng】倍【bèi】数（n倍）后再测定，计算【suàn】时请后乘【chéng】以总稀释倍数【shù】（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进【jìn】行，试【shì】验【yàn】结果【guǒ】判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-20℃。

2．有效期：6个月