犬缓激肽(BK)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T

35pg/mL - 1600pg/mL

使用目的：

本试剂盒用于测【cè】定犬血清、血浆及【jí】相关液【yè】体样【yàng】本【běn】中缓激肽(BK)含量。

实验原理

本试剂盒应【yīng】用【yòng】双抗体夹心【xīn】法测定标本中【zhōng】犬缓激肽(BK)水平【píng】。用纯化的犬缓激肽(BK)抗【kàng】体包被微孔板【bǎn】，制【zhì】成固相抗【kàng】体【tǐ】，往包【bāo】被单抗的微孔【kǒng】中依次加入犬缓【huǎn】激肽(BK)，再与HRP标记的犬缓激肽【tài】(BK)抗体结合，形成抗体【tǐ】-抗原-酶【méi】标抗体【tǐ】复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化【huà】下转【zhuǎn】化成蓝色，并在酸的作用【yòng】下转【zhuǎn】化成【chéng】终的。颜色的【de】深浅和样品中的缓激肽(BK)呈正相【xiàng】关。用酶标仪在450nm波长下测【cè】定吸【xī】光度（OD值），通过标准曲线计【jì】算【suàn】样品中犬缓激肽(BK)浓度【dù】。

犬缓激肽(BK)酶联免疫分析试剂盒试剂盒组成

标本要求 

1．标【biāo】本采集后尽早进行提取，提取【qǔ】按相【xiàng】关【guān】文献进行，提取后应尽快进行实验。若不【bú】能马上进行试验【yàn】，可【kě】将标本【běn】放于-20℃保存，但【dàn】应避免反【fǎn】复冻融【róng】

2．不能检测含NaN3的【de】样品，因NaN3抑制辣【là】根过【guò】氧化物酶的（HRP）活【huó】性。

操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍【bèi】标准品一【yī】支，用户【hù】可按照下列【liè】图表【biǎo】在小试管中进行【háng】稀释【shì】。

加样：分别设空白【bái】孔（空白对照【zhào】孔不加样品及酶【méi】标【biāo】试【shì】剂【jì】，其余【yú】各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标【biāo】包被板上标准品准确【què】加样50μl，待测样品孔【kǒng】中先加样品稀释【shì】液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释【shì】度为5倍）。加样将样品加于【yú】酶标【biāo】板【bǎn】孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃【huǎng】动【dòng】混【hún】匀【yún】。
温育【yù】：用封板【bǎn】膜封板后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心【xīn】揭掉【diào】封板膜，弃去【qù】液【yè】体【tǐ】，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃【qì】去，如此重复【fù】5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再【zài】加入显【xiǎn】色剂B50μl，轻轻【qīng】震荡混匀【yún】，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测【cè】定：以【yǐ】空白【bái】空调零，450nm波长【zhǎng】依序测量【liàng】各孔的吸光度（OD值【zhí】）。 测【cè】定应在加终止【zhǐ】液后15分钟以内【nèi】进行。

犬缓激肽(BK)酶联免疫分析试剂盒操作程序总结：

计算

  以【yǐ】标【biāo】准物的浓度为【wéi】横坐标【biāo】，OD值为【wéi】纵【zòng】坐标，在【zài】坐标纸上【shàng】绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓【nóng】度；再乘以稀释倍数；或用【yòng】标【biāo】准【zhǔn】物的浓度与OD值【zhí】计算出标准曲线的【de】直线回【huí】归方程式【shì】，将【jiāng】样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再【zài】乘以稀释倍数，即为样品【pǐn】的实际【jì】浓度【dù】。

犬缓激肽(BK)酶联免疫分析试剂盒注意事项

1．试【shì】剂盒从冷藏环境中取出【chū】应在室温平衡9-21分钟后方可【kě】使用【yòng】，酶标【biāo】包被板开封后如【rú】未用【yòng】完，板条应装入密封袋【dài】中保存。

2．浓洗涤【dí】液【yè】可【kě】能会有结晶析【xī】出【chū】，稀释时可【kě】在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应【yīng】使用加样器，并【bìng】经常校对其准【zhǔn】确【què】性，以避免试验误【wù】差。一次【cì】加样时间【jiān】控制在5分钟内，如标本数量多，推荐【jiàn】使【shǐ】用排枪加样。

请每【měi】次【cì】测【cè】定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待【dài】测物【wù】质含量过【guò】高（样本【běn】OD值大【dà】于【yú】标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释【shì】液稀释一定倍数（n倍）后再【zài】测定，计算时请后乘以总稀释【shì】倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说明书的操作进行【háng】，试【shì】验结果判定必须以酶标仪读数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月