山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

6ng/L - 160ng/L

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书使用目的：

本试【shì】剂盒用【yòng】于测定山羊血清、血浆及相关【guān】液体样【yàng】本中内皮【pí】素1(ET-1)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹【jiá】心法测定标【biāo】本中山羊内【nèi】皮素1(ET-1)水平。用纯【chún】化的山羊【yáng】内皮素【sù】1(ET-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包【bāo】被单抗的微孔中依次加【jiā】入内【nèi】皮素1(ET-1)，再与【yǔ】HRP标【biāo】记的内【nèi】皮素1(ET-1)抗体结合，形成抗【kàng】体【tǐ】-抗原【yuán】-酶标【biāo】抗体复合物，经过*洗【xǐ】涤后加【jiā】底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成【chéng】蓝色，并在酸【suān】的作【zuò】用下【xià】转化成终【zhōng】的。颜【yán】色的深浅和样【yàng】品中的【de】内皮素【sù】1(ET-1)呈正相关【guān】。用酶【méi】标仪在450nm波长下【xià】测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样【yàng】品中山【shān】羊内皮素【sù】1(ET-1)浓度【dù】。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本【běn】采集后尽早进行提取，提取按相关文献进【jìn】行，提取后应尽快【kuài】进行【háng】实验。若不能马上【shàng】进行【háng】试验【yàn】，可将标本放于-20℃保存【cún】，但应避免反【fǎn】复冻融【róng】

2．不能【néng】检测【cè】含NaN3的样品，因【yīn】NaN3抑制辣根过氧化物【wù】酶的（HRP）活性。

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准品【pǐn】的稀【xī】释：本【běn】试剂盒提供原倍标准【zhǔn】品【pǐn】一支，用户可按照下列图表在小试管中【zhōng】进行稀释。

加样：分别设空白【bái】孔（空白对照孔不【bú】加样品及酶标【biāo】试【shì】剂，其余各步操【cāo】作【zuò】相同【tóng】）、标准孔、待测样【yàng】品孔。在酶标包被板上标准【zhǔn】品准【zhǔn】确加样50μl，待测样品【pǐn】孔中先加样品【pǐn】稀释液【yè】40μl，然后再加待测样【yàng】品10μl（样品终稀释度【dù】为5倍）。加【jiā】样将样品【pǐn】加于【yú】酶标【biāo】板孔底部，尽量不触及孔【kǒng】壁，轻轻晃动【dòng】混匀。

温育【yù】：用封板膜封板后置【zhì】37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜【mó】，弃去【qù】液体【tǐ】，甩【shuǎi】干，每【měi】孔加满洗【xǐ】涤液，静置30秒后弃去，如此【cǐ】重复5次【cì】，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先【xiān】加入显色【sè】剂A50μl，再加【jiā】入显【xiǎn】色剂【jì】B50μl，轻轻震【zhèn】荡混匀，37℃避光显色10分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白空调零【líng】，450nm波长依序测量各孔的【de】吸光【guāng】度（OD值）。 测定【dìng】应【yīng】在加【jiā】终止液【yè】后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓度为横【héng】坐标【biāo】，OD值为纵坐标，在坐标纸上【shàng】绘【huì】出【chū】标准曲线，根据【jù】样品的OD值由标【biāo】准曲线查【chá】出相【xiàng】应的浓度；再乘以【yǐ】稀【xī】释倍数【shù】；或【huò】用标准物的浓度与OD值计【jì】算【suàn】出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方【fāng】程【chéng】式，计算出样品浓度【dù】，再【zài】乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

山羊内皮素1(ET-1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试【shì】剂盒从冷藏环【huán】境中取【qǔ】出【chū】应在【zài】室温平衡9-21分钟后方可【kě】使用，酶标包被板开【kāi】封【fēng】后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓【nóng】洗涤【dí】液可【kě】能会有结晶析出，稀释时可【kě】在水【shuǐ】浴中加温助溶，洗涤时不【bú】影响结果【guǒ】。

3．各步加【jiā】样均应使【shǐ】用加样器，并经常校对其准确性【xìng】，以避免【miǎn】试【shì】验误差。一次加【jiā】样【yàng】时间控制在5分【fèn】钟内，如标本数【shù】量【liàng】多【duō】，推【tuī】荐使用排枪加样。

请每【měi】次测【cè】定的同时【shí】做标准【zhǔn】曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值【zhí】大于【yú】标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一【yī】定倍数【shù】（n倍）后【hòu】再测定，计【jì】算【suàn】时请后【hòu】乘以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书【shū】的操【cāo】作进行，试验结果判【pàn】定必须以酶标仪读数【shù】为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月