大鼠酰基化Ghrelin（AG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

30ng/L - 1200 ng/L

使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清、血【xuè】浆及相关液体样【yàng】本中酰【xiān】基化【huà】Ghrelin（AG）含【hán】量。

大鼠酰基化Ghrelin（AG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应【yīng】用双【shuāng】抗体【tǐ】夹心法测定标本中大鼠【shǔ】酰【xiān】基化Ghrelin（AG）水平。用纯化的大鼠酰基化Ghrelin（AG）抗体包【bāo】被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中【zhōng】依次加入【rù】酰【xiān】基化Ghrelin（AG），再与HRP标记的【de】酰【xiān】基化【huà】Ghrelin（AG）抗体结合，形成抗【kàng】体-抗【kàng】原-酶标【biāo】抗体复合物，经过【guò】*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶【méi】的催化下转【zhuǎn】化成【chéng】蓝色，并在酸的【de】作【zuò】用下转化成终的。颜色【sè】的深浅和样品中的酰基【jī】化Ghrelin（AG）呈正【zhèng】相关【guān】。用【yòng】酶标仪在450nm波长下【xià】测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠酰基化【huà】Ghrelin（AG）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后【hòu】尽早进行提【tí】取，提取按相关文献进行，提【tí】取【qǔ】后【hòu】应尽【jìn】快进【jìn】行实验。若不能马上【shàng】进行试【shì】验，可将标【biāo】本【běn】放于-20℃保存【cún】，但应避免反复冻融

2．不能【néng】检【jiǎn】测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧【yǎng】化物【wù】酶的（HRP）活性。

大鼠酰基化Ghrelin（AG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的【de】稀【xī】释：本试【shì】剂盒提【tí】供原【yuán】倍标准品一支，用户可按照下列图【tú】表在小试管中进行稀释。

加样：分别设空白孔【kǒng】（空白【bái】对照孔不加样【yàng】品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待【dài】测【cè】样品孔。在酶标包被板上标【biāo】准品准确加样50μl，待测样品孔中先加【jiā】样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样【yàng】品【pǐn】终稀释度为【wéi】5倍【bèi】）。加样将样品加于酶标板孔【kǒng】底部，尽量不【bú】触及【jí】孔壁，轻轻晃动【dòng】混【hún】匀【yún】。

温【wēn】育【yù】：用封板膜封板后置37℃温【wēn】育30分钟【zhōng】。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心【xīn】揭掉封板膜，弃去液体【tǐ】，甩干，每【měi】孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次【cì】，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加【jiā】入显色剂A50μl，再【zài】加入【rù】显色剂B50μl，轻轻震荡混匀【yún】，37℃避【bì】光显色【sè】10分【fèn】钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空【kōng】白空调零【líng】，450nm波长【zhǎng】依序测量【liàng】各孔的吸光度（OD值【zhí】）。 测【cè】定应在加终止液后15分钟【zhōng】以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准【zhǔn】物的浓【nóng】度为【wéi】横坐标，OD值为纵【zòng】坐标，在坐标纸上绘【huì】出标准曲线【xiàn】，根【gēn】据样品的【de】OD值由标准曲线【xiàn】查出相应的【de】浓度；再乘以稀【xī】释【shì】倍数；或用标【biāo】准物【wù】的浓度与OD值【zhí】计算出标准曲线的直线【xiàn】回【huí】归方程式，将样品的OD值代入方【fāng】程式，计算【suàn】出样【yàng】品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓【nóng】度。

大鼠酰基化Ghrelin（AG）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境【jìng】中取出【chū】应在室温平衡【héng】9-21分钟后方可【kě】使【shǐ】用，酶标包被板开【kāi】封后如未用完，板条【tiáo】应装入密封袋【dài】中保【bǎo】存。

2．浓洗【xǐ】涤液可能会有结晶析出，稀释时【shí】可在【zài】水浴【yù】中加【jiā】温助【zhù】溶，洗涤时不影响【xiǎng】结果。

3．各步加样均应使用加样【yàng】器，并经【jīng】常校对其【qí】准确【què】性，以【yǐ】避免试验【yàn】误差。一次【cì】加样时间控制在5分钟内，如标本【běn】数【shù】量多，推【tuī】荐使用排枪加【jiā】样。

请每【měi】次【cì】测定的同时做标准曲线，做复孔【kǒng】。如标本中【zhōng】待【dài】测物质含【hán】量过高（样本OD值大于标准品孔孔的【de】OD值），请先【xiān】用样品【pǐn】稀释液稀释一【yī】定倍数（n倍）后再测定，计算【suàn】时请后乘以【yǐ】总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严【yán】格按照说明书的操作【zuò】进行，试【shì】验结【jié】果判定必须以酶标仪读【dú】数为【wéi】准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月