植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

3ng/L -120 ng/L

使用目的：

本试剂【jì】盒用【yòng】于测定植物组【zǔ】织，细胞及其它相关样本【běn】中表【biǎo】皮生长因子（EGF）含量。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本【běn】试【shì】剂【jì】盒应【yīng】用双抗体夹心【xīn】法测【cè】定【dìng】标本中植物【wù】表皮【pí】生长因子（EGF）水平。用纯化的植物表皮【pí】生长因子（EGF）抗体包被【bèi】微【wēi】孔板，制成固相抗体，往包【bāo】被单抗的微孔中依次加入植物表皮【pí】生长因子（EGF），再与HRP标记的表皮生长因子（EGF）抗体结【jié】合，形成抗体【tǐ】-抗【kàng】原-酶标抗【kàng】体复合物，经过【guò】*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化【huà】下转化【huà】成蓝色【sè】，并在【zài】酸的作用下转化成终的【de】。颜色【sè】的深浅和样【yàng】品【pǐn】中的植物表皮生长因子（EGF）呈正【zhèng】相关【guān】。用酶标【biāo】仪【yí】在450nm波【bō】长下测定吸【xī】光【guāng】度（OD值），通过标【biāo】准曲线计算样品中植物表皮生长【zhǎng】因子（EGF）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相【xiàng】关文献进行【háng】，提取【qǔ】后应尽快进行实验。若不能马【mǎ】上进行试【shì】验【yàn】，可将标本放【fàng】于【yú】-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的【de】样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶【méi】的（HRP）活【huó】性。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准品的稀释：本【běn】试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按【àn】照下列图表在小【xiǎo】试【shì】管【guǎn】中进【jìn】行稀释。

加样：分别设空白孔【kǒng】（空【kōng】白对照孔不加样【yàng】品及【jí】酶标【biāo】试剂，其余各步操作【zuò】相同）、标准孔、待测【cè】样品孔。在酶标包被【bèi】板上标准品准确【què】加样50μl，待测样品孔【kǒng】中先加【jiā】样品稀释液40μl，然后【hòu】再【zài】加待测样品10μl（样品终稀【xī】释度【dù】为5倍）。加样将样品【pǐn】加于酶标【biāo】板孔底部，尽【jìn】量不【bú】触及孔壁，轻轻晃动混【hún】匀。

温育：用封板膜封板【bǎn】后置37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤【dí】：小【xiǎo】心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静【jìng】置【zhì】30秒后弃去，如此重【chóng】复5次，拍【pāi】干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显【xiǎn】色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震【zhèn】荡混匀，37℃避【bì】光显色【sè】15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空白空调【diào】零，450nm波长【zhǎng】依【yī】序测【cè】量各【gè】孔的吸光【guāng】度（OD值【zhí】）。 测定应在加终止液后15分【fèn】钟以内进行。

操作程序总结：

计算

  以标准物的浓【nóng】度为横坐标【biāo】，OD值为纵坐标【biāo】，在【zài】坐标纸【zhǐ】上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲【qǔ】线查出相应的【de】浓度；再【zài】乘以【yǐ】稀释倍数；或用标准【zhǔn】物的【de】浓【nóng】度与【yǔ】OD值计算【suàn】出标【biāo】准【zhǔn】曲线【xiàn】的直【zhí】线回归方程式，将【jiāng】样【yàng】品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以【yǐ】稀释倍数，即为样品的实【shí】际浓【nóng】度。

植物表皮生长因子（EGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试剂盒从冷藏环境【jìng】中取出应【yīng】在室温【wēn】平衡9-21分【fèn】钟后方可使用，酶标包被板开封【fēng】后如【rú】未用完，板条应装【zhuāng】入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会【huì】有结晶析【xī】出【chū】，稀释时可在水【shuǐ】浴中加温助溶，洗【xǐ】涤时不【bú】影响结果【guǒ】。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避【bì】免试验误【wù】差。一次【cì】加样时【shí】间【jiān】控制在【zài】5分【fèn】钟内【nèi】，如标本数量多，推荐使【shǐ】用排【pái】枪【qiāng】加样。

请每次测定的同时做标准曲线，做【zuò】复孔。如标本中待测【cè】物质【zhì】含【hán】量过【guò】高【gāo】（样本OD值大【dà】于标准品孔孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定【dìng】倍【bèi】数（n倍【bèi】）后再测【cè】定【dìng】，计算【suàn】时请【qǐng】后乘以【yǐ】总稀【xī】释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明【míng】书【shū】的操作进行，试验结果判定【dìng】必须以酶标【biāo】仪读数为准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月