鸡脑钠素（BNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

3μg/L -140μg/L

使用目的：

本【běn】试剂盒【hé】用于测定鸡【jī】血清、血【xuè】浆【jiāng】及相关液【yè】体样本中脑钠素（BNP）含量。

鸡脑钠素（BNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂盒应【yīng】用双【shuāng】抗体夹【jiá】心【xīn】法测定标本中鸡脑钠【nà】素（BNP）水平【píng】。用纯化的【de】鸡脑钠素（BNP）抗体包被微孔【kǒng】板【bǎn】，制成固相抗体，往包被【bèi】单抗的微孔【kǒng】中依次加入【rù】脑钠素（BNP），再与HRP标记的脑【nǎo】钠素（BNP）抗体【tǐ】结【jié】合，形成抗体-抗【kàng】原-酶标【biāo】抗体复合物，经过【guò】*洗涤后加底【dǐ】物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下【xià】转化【huà】成蓝色【sè】，并在酸的作用下转化成终的。颜色的【de】深【shēn】浅和样品中【zhōng】的【de】脑钠素（BNP）呈正相关。用酶标仪在【zài】450nm波长下测定吸光度【dù】（OD值），通【tōng】过标准【zhǔn】曲线计【jì】算样【yàng】品中鸡脑钠【nà】素（BNP）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本【běn】采【cǎi】集后【hòu】尽【jìn】早进行提【tí】取，提取【qǔ】按相关文献进行，提取后应【yīng】尽快【kuài】进【jìn】行实验。若不能马上【shàng】进行【háng】试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融【róng】

2．不能【néng】检测含【hán】NaN3的【de】样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶【méi】的【de】（HRP）活性。

鸡脑钠素（BNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标【biāo】准品的【de】稀释：本试【shì】剂盒提供【gòng】原倍标【biāo】准品一支，用【yòng】户可按照下列图表在小试管中进行【háng】稀释【shì】。

加样：分别设【shè】空白孔（空白对照【zhào】孔不加样【yàng】品及酶标试【shì】剂，其余各步【bù】操作【zuò】相同）、标准【zhǔn】孔、待测样【yàng】品孔。在酶标包被板上标准【zhǔn】品准确【què】加样50μl，待测样品孔中【zhōng】先加样品【pǐn】稀释液40μl，然后再加待测样品【pǐn】10μl（样品终稀释度为5倍）。加样【yàng】将样品加【jiā】于酶标板孔底【dǐ】部，尽【jìn】量不触及孔壁，轻轻晃【huǎng】动混匀。
温育：用【yòng】封板膜【mó】封板后置【zhì】37℃温育30分钟。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗【xǐ】涤：小心揭掉封板【bǎn】膜，弃去【qù】液【yè】体，甩干，每孔加满洗涤液【yè】，静【jìng】置30秒后【hòu】弃去，如此【cǐ】重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再【zài】加入显色【sè】剂B50μl，轻轻震【zhèn】荡混【hún】匀，37℃避光显色10分钟【zhōng】.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以空【kōng】白【bái】空调【diào】零【líng】，450nm波长依序【xù】测量各【gè】孔的吸光度（OD值【zhí】）。 测定应在加终止液后15分钟以内进【jìn】行。

操作程序总结：

计算

  以标准【zhǔn】物的【de】浓度【dù】为横坐标，OD值为纵【zòng】坐【zuò】标，在坐标纸上【shàng】绘出标【biāo】准【zhǔn】曲【qǔ】线，根据样品【pǐn】的OD值由标准曲【qǔ】线查出【chū】相应的浓度【dù】；再乘以稀释倍数【shù】；或【huò】用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方【fāng】程式，将样品的OD值代入方【fāng】程式，计算出样品浓度【dù】，再乘【chéng】以稀释倍数【shù】，即为样品的实际浓【nóng】度。

鸡脑钠素（BNP）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试【shì】剂盒【hé】从【cóng】冷藏环【huán】境中取出应【yīng】在【zài】室温平衡9-21分钟后方可使【shǐ】用，酶标包【bāo】被板开封后如未用完【wán】，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液【yè】可能会有结晶析【xī】出，稀释【shì】时可【kě】在水【shuǐ】浴中加温【wēn】助溶，洗涤时不影【yǐng】响结果。

3．各步加样均【jun1】应使用加样【yàng】器，并经常校对其准确性【xìng】，以避免试验误差。一次【cì】加样时间【jiān】控制在5分钟内，如标本数量【liàng】多，推荐使【shǐ】用【yòng】排枪加样。

请每次测定的同时做标【biāo】准曲【qǔ】线，做复孔。如【rú】标本中待测物【wù】质【zhì】含量【liàng】过高（样本OD值大于标准品孔孔的OD值【zhí】），请先用样品稀【xī】释液【yè】稀释一定倍数【shù】（n倍【bèi】）后再测定，计算时请【qǐng】后乘以总稀释倍数【shù】（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说【shuō】明书的操作【zuò】进行，试验【yàn】结果【guǒ】判定必须以【yǐ】酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月