羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T

1.5pg/ml-40pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测【cè】定羊【yáng】血清、血浆及相【xiàng】关液体样本【běn】中布鲁氏菌【jun1】（Brucellosis）的含【hán】量。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理

本试剂【jì】盒应用双抗【kàng】体夹心法测【cè】定标本中羊布鲁【lǔ】氏菌（Brucellosis）水平。用纯化的羊布【bù】鲁【lǔ】氏菌（Brucellosis）抗体包被微孔板，制成【chéng】固相抗体，往包被单【dān】抗的微孔中依次加【jiā】入【rù】布鲁氏【shì】菌（Brucellosis），再【zài】与HRP标【biāo】记的布鲁氏菌（Brucellosis）抗【kàng】体结【jié】合，形成抗体-抗【kàng】原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加【jiā】底物TMB显【xiǎn】色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下【xià】转化成【chéng】终的【de】。颜色的深浅和【hé】样【yàng】品中的【de】布鲁氏菌（Brucellosis）呈【chéng】正相关。用【yòng】酶标【biāo】仪【yí】在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲【qǔ】线计算样品【pǐn】中【zhōng】羊布【bù】鲁氏菌【jun1】（Brucellosis）浓度。

试剂盒组成

标本要求 

1．标本采【cǎi】集后尽早进行提取，提取【qǔ】按相关文献【xiàn】进行【háng】，提取后应尽快进行实验【yàn】。若不能马上进行试验，可将【jiāng】标本【běn】放于【yú】-20℃保存，但应【yīng】避免反复冻【dòng】融【róng】

2．不能检测【cè】含NaN3的样品，因NaN3抑制辣【là】根【gēn】过氧化【huà】物【wù】酶的（HRP）活性。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍【bèi】标【biāo】准品【pǐn】一支，用【yòng】户可按【àn】照下列图【tú】表【biǎo】在小试管中进行稀释【shì】。

加【jiā】样：分别设空【kōng】白【bái】孔（空白对照孔【kǒng】不加样品及酶标试剂，其余各步【bù】操作相同）、标准孔【kǒng】、待【dài】测样品孔。在酶标包【bāo】被板上标【biāo】准品准确加样【yàng】50μl，待【dài】测样【yàng】品孔中先加【jiā】样品稀释液40μl，然后再加待测【cè】样品10μl（样品【pǐn】终稀释度【dù】为5倍【bèi】）。加样将样【yàng】品加于酶标板孔底部，尽量不触及【jí】孔壁，轻轻晃动混匀【yún】。
温育【yù】：用封板膜封板后置【zhì】37℃温【wēn】育30分钟【zhōng】。   
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心【xīn】揭掉封板膜，弃去液体【tǐ】，甩干，每孔【kǒng】加满洗【xǐ】涤液，静置【zhì】30秒后弃【qì】去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入【rù】显【xiǎn】色剂【jì】A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻【qīng】震荡混【hún】匀【yún】，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
测定：以【yǐ】空白空调【diào】零，450nm波长【zhǎng】依序测量各孔【kǒng】的【de】吸光度（OD值）。 测定应在加终【zhōng】止【zhǐ】液后15分钟以内进行【háng】。

操作程序总结：

计算

  以标准【zhǔn】物的浓【nóng】度为横【héng】坐标，OD值【zhí】为纵坐标，在【zài】坐标纸上绘出【chū】标【biāo】准曲线，根据【jù】样品的OD值由标准曲【qǔ】线查出相【xiàng】应的【de】浓度；再乘以稀释倍数；或用标【biāo】准物的浓度【dù】与OD值计算出标准曲【qǔ】线的直【zhí】线【xiàn】回归方程【chéng】式，将样品的【de】OD值代入方程式，计【jì】算出样【yàng】品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度【dù】。

羊布鲁氏菌（Brucellosis）酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项

1．试【shì】剂盒从冷藏环【huán】境【jìng】中取【qǔ】出应在室温平衡9-21分【fèn】钟后方可使用，酶标包被板开封后【hòu】如【rú】未用完，板条应装入密封袋【dài】中【zhōng】保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶【jīng】析出【chū】，稀释时可在水浴中加温【wēn】助溶，洗【xǐ】涤时【shí】不影响结果。

3．各【gè】步加样均【jun1】应使用【yòng】加样器【qì】，并经常【cháng】校对其准【zhǔn】确性，以避免试验误差。一【yī】次加样时间控【kòng】制在5分钟内【nèi】，如【rú】标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准【zhǔn】曲【qǔ】线【xiàn】，做复孔。如标【biāo】本中待测物质含量过高（样本【běn】OD值【zhí】大【dà】于【yú】标准品孔【kǒng】孔的OD值），请先用【yòng】样【yàng】品稀释液稀释一定倍数（n倍【bèi】）后再测定，计算时请后【hòu】乘【chéng】以总稀释倍数（×n×5）。
封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按【àn】照说【shuō】明书的操作【zuò】进行，试【shì】验结果判定必须以酶标仪读数【shù】为准【zhǔn】.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

保存条件及有效期

1．试剂盒保存：；9-21℃。

2．有效期：6个月